細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
人細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:GIST-48

類型:貼壁生長

形態(tài):形態(tài)上表現(xiàn)為梭形或/和上皮樣細(xì)胞@2017

分離基物:人，

提供形式:T25培養(yǎng)瓶細(xì)胞/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%McCoy’s 5A+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

存儲(chǔ)條件:90%FBS+10%DMSO 液氮

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到人細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是人細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
C57BL/6小鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cellsAc-YVAD-肽核酸Ac-YVAD-pNA質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

HME6細(xì)胞，人色素瘤細(xì)胞 動(dòng)物雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0919β-丙內(nèi)酯(>95.0%(GC)(T))β-Propiolactone質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)(T)

UMR-106(大鼠細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2DL-丙交酯(>98.0%(T))DL-Lactide質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Hut-102(人皮膚T瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐藥細(xì)胞株 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY1022L-(-)-交酯(>98.0%(T))L-(-)-Lactide質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92 [NK92]δ-戊內(nèi)酯(>98.0%(GC))δ-Valerolactone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
人平滑肌細(xì)胞總RNAHBVSMC tDNA牛血紅蛋白質(zhì)量規(guī)格：BRHemoglobin

山羊皮膚成纖維樣細(xì)胞;DG-S1 胚腎細(xì)胞，AAV-293細(xì)胞 HP615細(xì)胞，615小鼠瘤株聚乙二醇10000質(zhì)量規(guī)格：分子量9,000~11,000PEG 10000

人干細(xì)胞因子單*抗體細(xì)胞株;AMS2(SCF3)DL-蘋果酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRDL-Malic acid

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Common magpie/Hong Kong/2256/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-酪氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRD-Tyrosine

CL-0301M-NFS-60 (小鼠細(xì)胞G-CSF依賴性)5×106cells/瓶×2D-組氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRD-Histidine
615小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性瘤株;L615 小鼠腎足突細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL10-脫乙酰巴卡亭質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR10-Deacetylbaccatin III

人絨毛膜內(nèi)皮細(xì)胞 Human維生素B1(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品vitamin B1

EFNA2 Others Mouse 小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 維生素B1質(zhì)量規(guī)格：>99%,USPVitamin B1

人無色素睫狀上皮細(xì)胞HNPCEpiC維生素B12(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品vitamin B12

NOV Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured)10-十一炔-1-醇(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)10-Undecyn-1-ol
人細(xì)胞培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL煙酸乙酯(>Ethyl nicotinate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

HS-4細(xì)胞，人細(xì)胞系 鼠傷寒沙門氏菌Ta97 雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12二茂鐵Ferrocene質(zhì)量規(guī)格：>98%

XCL1 Protein Canine 重組狗 XCL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)反苯環(huán)丙胺鹽酸鹽；單胺氧化酶(MAO)抑制劑Tranylcypromine (2-PCPA) HCl質(zhì)量規(guī)格：>97%,單胺氧化酶(MAO)抑制劑

ME-180(人子宮頸表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 黃胺酸(>96.5%，BS)Flavianic acid hydrate質(zhì)量規(guī)格：>96.5%，BS

敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21酸性品紅鈣(>60%，BS)Fuchsin acid calcium salt質(zhì)量規(guī)格：>60%，BS