細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　小鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:TC1

類型:懸浮生長(zhǎng)

形態(tài):淋巴母細(xì)胞

提供形式:T25培養(yǎng)瓶/凍存管(ATCC)

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:85%IMDM+15%FBS

傳代方法:Protocol: Cultures can be maintained by addition of fresh medium. Alternatively, cultures can be established by centrifugation with subsequent resuspension at 5 X 10(4) viable cells/ml. Do not allow the cell concentration to exceed 5 X 10(5) viable cells/ml.<br>Interval: Maintain cultures at a cell concentration between 5 x 10(4) and 5 X 10(5) cells/ml.<br>Medium Renewal: Add fresh medium every 2 to 3 days (depending on cell density)

生長(zhǎng)條件:95%空氣+5%二氧化碳，37.0°C

存儲(chǔ)條件:90%FBS+10%DMSO 液氮

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到小鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是小鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞秦皮甲素（標(biāo)準(zhǔn)品）Esculin質(zhì)量規(guī)格：≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CW-2人腺癌細(xì)胞 CW-2 human colon adenocarcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS氨基三乙酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Nitrilotriacetic acid質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法雜質(zhì)檢查用

TNFSF13 Protein Mouse 重組小鼠 TNFSF13 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)1，3-（標(biāo)準(zhǔn)品）1,3- Propylene Glycol質(zhì)量規(guī)格：供檢查用

人脂肪細(xì)胞-皮下(HPA-s)(1×106 ) Raji，人Butt's瘤細(xì)胞 Human二甘醇（標(biāo)準(zhǔn)品）Diethylene Glycol質(zhì)量規(guī)格：供檢查用

人;Calu-3氯噻嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）Chlorothiazide質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用
人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞( Hac) (1×106 )4-甲氨基安替比林（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供檢查用4-(Methylamino)-antipyrine

SKOV3 [SK-OV-3], 人腺癌細(xì)胞系硫酸肼（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供TLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用Hydrazine sulfate

人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;UACC812 大鼠腎系膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL硫酸肼（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供檢查用Hydrazine sulfate

Lewis 小鼠細(xì)胞環(huán)扁桃酯（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定Cyclandelate

FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 劍麻皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Tigogenin
CL-0344HAN(人羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2葉綠素，英文名或英文縮寫：Chlorophyll，級(jí)別：BR，85%，規(guī)格：10/支

NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞碳化硼 Boron ccrbidq;Tqtrcboron ccrbidq 1069-3-8

人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞;HES 人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL固K，英文名或英文縮寫：Fast Black K Salt，級(jí)別：超，99%，規(guī)格：25克

人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞cDNAHPASMC cDNANZ-AMINEA酶水解酪素細(xì)菌學(xué)級(jí)500GCOLD

ERBB3 Others Rat 大鼠 HER3 / ErbB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (中性紅)
小鼠B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO鹽酸雷尼替丁Ranitidine HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%

Tul-1細(xì)胞，人細(xì)胞系 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞,WB-F344細(xì)胞 T-101B胰蛋白酶(含100mL 酶解緩沖液)10mL鹽酸雷尼替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)Ranitidine HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

SK-MES-1(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2熒光素鈉Fluorescein di salt質(zhì)量規(guī)格：BS

HUVEC-c pre-screened 預(yù)選型正常人臍內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 500,000cells 大隱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-蟲熒光素鈉鹽;D-熒光素鈉鹽D-Luciferin  salt質(zhì)量規(guī)格：>98%

原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml2ˊ,7ˊ-二氯熒光素鈉鹽2',7'-Dichlorofluorescein  Salt 質(zhì)量規(guī)格：>98%