人紅白細胞細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人紅白細胞細胞培養(yǎng)
種屬:HEL

類型:外周血

形態(tài):淋巴母細胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

生長特性:懸浮生長
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人紅白細胞細胞培養(yǎng)的相關熱銷產(chǎn)品：
3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞 MouseD-氨基葡萄糖鹽酸鹽D-Glucosamine 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

TNFRSF10A Others Human 人 TNFRSF10A / CD261 / APO2 人細胞裂解液 (陽性對照) 奧卡西平Oxcarbazepine質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR

人細胞;SMMC-7721奧卡西平（標準品）Oxcarbazepine質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品

3. 毛發(fā)細胞系統(tǒng)金絲桃素(標準品)Hypericin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

小鼠神經(jīng)干細胞D-葡萄糖-6-1酸D-（+）-Glucopyranose 6-phosphate質(zhì)量規(guī)格：1M in H2O(260Mg/ml),進口原裝
人*微內(nèi)皮細胞總RNAHCMEC NA1,3-雙(氯甲基)四甲基二硅氮烷(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)1,3-Bis(chloromethyl)tetramethyldisilazane

ZR75-30細胞，人癌細胞 129小鼠ES細胞,E14細胞 HNE2, 人細胞系1,3-二苯基四甲基二硅氮烷(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)Tetramethyl-1,3-diphenyldisilazane

MX-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2N-亞硝基-N-甲基尿烷(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)N-Methyl-N-nitrosourethane

HDMEC Pellet 人真皮微內(nèi)皮細胞團塊(少年者) > 1 mio.cells 成纖維細胞培養(yǎng)基FM-prfMUG;4-甲基傘型酮-beta-D-葡糖苷酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR4-MUG

CL-0373KiMA(人胚腎上皮細胞系)5×106cells/瓶×2米諾地爾質(zhì)量規(guī)格：>98%Minoxidil
NIH:OVCAR-3細胞，細胞 人細胞,KYSR450細胞 豚鼠皮膚細胞;GP-S22',3'-O-異亞丙級-6-核苷巰基嘌呤質(zhì)量規(guī)格：美國進口2',3'-O-Isopropylidene-6-mercaptopurine riboside

tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-3A12-氨基-6-羥基-8-巰基嘌呤質(zhì)量規(guī)格：美國進口2-Amino-6-hydroxy-8-mercaptopurine

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Vietnam/1194/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-氨基-6-巰基嘌呤-9-D-核苷水合物質(zhì)量規(guī)格：美國進口2-Amino-6-mercaptopurine-9-D-riboside Hydrate

人心肌細胞-RNAHCM-a miRNA5 μgS-甲基-3-硫代對乙酰氨基酚質(zhì)量規(guī)格：美國進口S-Methyl-3-thioacetaminophen

HEPACAM2 Others Rat 大鼠 HepaCAM2 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-羥基奈韋拉平質(zhì)量規(guī)格：美國進口2-Hydroxy Nevirapine
人紅白細胞細胞培養(yǎng)BxPC-3, 人原位*腺癌細胞株米帕明/丙咪嗪（標準品）Clomipramine HCL 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

人急性早幼粒細胞;HL-60 大鼠上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL硫酸氫氯吡格雷 I型Clopidogrel Bisulfate質(zhì)量規(guī)格：>98%,I型

原代平滑肌細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml硫酸氫氯吡格雷 II型(標準品)Clopidogrel Bisulfate質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品

FAS Others Cynomolgus 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸氫氯吡格雷 II型Clopidogrel Bisulfate質(zhì)量規(guī)格：含量97.0%-101.5%，II型

中國倉鼠卵巢細胞;CTLA4 Ig-24萘丁美酮/萘普酮Nabumetone質(zhì)量規(guī)格：>99%
收到人紅白細胞細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。