細胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細胞之方法：
人非小細胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人非小細胞培養(yǎng)
種屬:NCI-H157

形態(tài):多角　

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:RPMI1640(w/oHepes)10%FBS；10mMHepes+1mM丙銅酸鈉　

傳代方法:1:3傳代；5~7天1次。

生長特性:貼壁生長　

存儲條件:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人非小細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人非小細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細胞;201184苯并［g,h,i］芘(標準品)Benzo[ghi]perylene質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

BHK細胞，幼倉鼠腎細胞 人*癌細胞,CFPAC-1細胞 CM-R093大鼠胎兒真皮成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL1-十八1(標準品)1-Octadecene質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.5%(GC)

大鼠*外分泌腺細胞;AR42J辛胺(標準品)n-Octylamine質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.5%(GC)

RTN4R Others Human 人 RTN4R / NOGOR 人細胞裂解液 (陽性對照) 十八烷(標準品)Octadecane質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.5%(GC)

人骨骼肌成肌細胞cDNAHSkMM cDNA2-辛酮(標準品)2-Octanone質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.5%(GC)
小耳豬肺細胞;SEP-L1丹酚酸C（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Salvianolic acid C

PTPN12 Others Human 人 PTPN12 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 丹酚酸D(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Salvianolic acid D

腎動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)膽(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Cholesterol

散鱗鏡鯉尾鰭細胞;YZ21 人成纖維細胞，Hs 578Bst細胞 HO-8910PM(高轉(zhuǎn)移細胞)膽質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRCholesterol

人結(jié)細胞;T84丹蒽醌（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定1,8-Dihydroxyanthraquinone
人臍帶單核細胞完全培養(yǎng)基 100mL親和硅烷shēng huà shì jì容量：25000u

143TK細胞，人胸腺激酶缺陷性細胞系 鼠傷寒沙門氏菌Ta100 大鼠腎小球系膜細胞;HBZY-1減藍6B;減性藍6B;六藍光減染天藍 clkcli bluq 6B;Nicholson bluq;Triphqnyl tricMinotriphqnylccrbinol sulfonic ccid wo7ium sclt;C.I.42765 134-80-7

CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 標簽)溴化青;青化溴 Cycnogqn broMidq 206-68-3

MG-63(人細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 人細胞裂解液 (陽性對照) 牛血清白蛋白標準溶液shēng huà shì jì容量：1公斤

犬胸腺細胞;cf2ThCollagenII 1g Worthington原裝
人非小細胞培養(yǎng)原代神經(jīng)元細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml鹽酸伊立替康-d10Irinotecan-d10 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人結(jié)直腸腺癌細胞;HCT-8 [HRT-18] 大鼠卵巢顆粒細胞完全培養(yǎng)基 100mL硫酸卡那霉素Kanamycin sulfate質(zhì)量規(guī)格：美國進口

EMT-6 小鼠癌卡那霉素AKanamycin A質(zhì)量規(guī)格：美國進口

ERBB2 Others Rhesus 恒河猴 ErbB2 / HER2 人細胞裂解液 (陽性對照) 卡那霉素B硫酸鹽Kanamycin B sulfate質(zhì)量規(guī)格：美國進口

雜交瘤(B類);Z1510C6D10F4G6卡那霉素A硫酸鹽Kanamycin A Sulfate質(zhì)量規(guī)格：美國進口