人平滑肌細(xì)胞說(shuō)明書(shū)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人平滑肌細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
種屬:HBVSMC

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級(jí):2

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

生長(zhǎng)條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

存儲(chǔ)條件:90%FBS+10%DMSO 液氮
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人平滑肌細(xì)胞說(shuō)明書(shū)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
Promocell C-28015 Mesenchymal Stem CellNeurogenic Differe. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)性分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml吡羅昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)Piroxicam質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人內(nèi)皮細(xì)胞HCAEC泊沙康唑Posaconazole質(zhì)量規(guī)格：>99%

SERPINE1 Others Rat 大鼠 SerpinE1 / PAI-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 泊沙康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Posaconazole質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1利福昔明Riimin質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

大鼠細(xì)胞;Y3-Ag 1.2.3 ，SPC-A-1細(xì)胞 B/c-ES細(xì)胞，BALB/c小鼠ES細(xì)胞利福昔明(標(biāo)準(zhǔn)品)Riimin質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肺平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL間氟-DL-酪氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.99m-Fluoro-DL-tyrosine

NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞 NIH/3T3 mouse embryo cells DMEM+10% FBS鈣蛋白酶抑制劑I(進(jìn)口)質(zhì)量規(guī)格：≥95%,美國(guó)進(jìn)口Calpain Inhibitor I(ALLN)

IL36B Protein Human 重組人 IL36B / IL1F8 蛋白 (His 標(biāo)簽)DL-丙氨酰-DL-丙氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.97DL-Ala-DL-Ala

NCI-H2170(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 HT-29(細(xì)胞)N-乙酰-DL-谷氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAc-DL-Glu-OH

CL-0394NCI-H2170(人肺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2DL-α-氨基己二酸,2-氨基己二酸質(zhì)量規(guī)格：>97%,混旋DL-a-Aminoadipic acid
SMMC-7721細(xì)胞，細(xì)胞 人羊膜細(xì)胞系,Wish細(xì)胞 倉(cāng)鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞;145-2C113,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐醇(>94.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>94.0%(GC)3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Alcohol

雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E73,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐溴(>97.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)(T)3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Bromide

HAVCR1 Others Human 人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3,5-雙[3,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐氧基]芐溴(>97.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)3,5-Bis[3,5-bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyloxy]benzyl Bromide

人*成纖維細(xì)胞-心室RNAHCF-av miRNA5 μg3',5'-二乙酰氧基苯乙酮(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)3',5'-Diacetoxyacetophenone

大鼠*管狀上皮細(xì)胞(RRTEpiC)(5×105)3',5'-二溴-4'-羥基苯乙酮(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)3',5'-Dibromo-4'-hydroxyacetophenone
人平滑肌細(xì)胞說(shuō)明書(shū)HAVCR1 Others Mouse 小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 一水脫氧膽酸鈉 deoxycholate monohydrate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

真皮微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)雷米普利拉-d5Ramiprilat-d5質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

RPS6KA2 Others Human 人 RSK3 / RPS6KA2 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 雷米普利-d3 Ramipril-d3質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-HCV-NS5A雷米普利拉Ramiprilat質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

VERO C1008細(xì)胞，非洲綠猴腎細(xì)胞 人*腺泡上皮癌,HPAC細(xì)胞 CM-M087小鼠軟骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL甲基4,7,8,9-四-O-乙酰-2-硫代-N-乙酰-a-D-神經(jīng)氨酸甲酯Methyl4,7,8,9-tetra-O-acetyl-2-thio-N-acetyl-a-D-neuraminic acidmethylester質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
收到人平滑肌細(xì)胞說(shuō)明書(shū)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。