細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
人外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱(chēng)　人外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:PBMC

類(lèi)型:懸浮生長(zhǎng)

分離基物:人，外周血單核細(xì)胞

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:1640，90%；FBS，10%；雙抗

生長(zhǎng)條件:Temperature: 37.0°C Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

存儲(chǔ)條件:Freeze medium: FBS/NBS, 92%; DMSO, 8% Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù)，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到人外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是人外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
CM-R002大鼠肺平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL丙磺舒（標(biāo)準(zhǔn)品）Probenecid質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

NCI-N87細(xì)胞，人胃腺癌細(xì)胞 人跟細(xì)胞,Hp2/o細(xì)胞 草魚(yú)腎細(xì)胞;GIK諾氟沙星Norfloxacin質(zhì)量規(guī)格：>99,USP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

DH82(犬巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2諾氟沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Norfloxacin質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CA9 Others Human 人 CAIX / CA9 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 諾氟沙星鹽酸鹽Norfloxacin HCl質(zhì)量規(guī)格：含量大于98.5%

人滑膜細(xì)胞總RNAHS NA諾氟沙星鹽酸鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）Norfloxacin HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠膀胱成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL蔗糖質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級(jí)Sucrose

AtT-20小鼠細(xì)胞 AtT-20 mouse pituitary tumor cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSD-海藻糖二水質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BRD-(+)-Trehalose, dihydrate

IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)亮綠SF(淡黃)質(zhì)量規(guī)格：BSLight Green SF Yellowish

U-118 MG(人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤) 5×106cells/瓶×2 SK-OV-3 [SKOV-3](人細(xì)胞)健那綠B質(zhì)量規(guī)格：BSJanus Green B

CM-M012小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL酸性綠3質(zhì)量規(guī)格：BS，進(jìn)口原裝Guinea Green B
A9細(xì)胞，皮下結(jié)締組織細(xì)胞 人肝星形細(xì)胞正常,LX-2細(xì)胞 CL-0088H4-IIE(大鼠細(xì)胞 )5×106cells/瓶×25-尿苷質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR5-Iodo-Uridine

敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-215--2'-脫氧尿苷(苷)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR5-Iodo-deoxyuridine

FCN1 Others Human 人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 5--2'-脫氧胞苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR5-Iodo-deoxycytidine

神經(jīng)元細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)2'-甲氧基尿苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2’-OMe Uridine

NA Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) TES. Na;2-[(三(羥甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>99%,ARTES
人外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)乙二醇雙[4-(乙氧羰基)苯基](>98.0%(GC))Ethylene Glycol Bis[4-(ethoxycarbonyl)phenyl] Ether質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

FRhK-4細(xì)胞，恒河猴胚腎細(xì)胞 人胚胎*組織來(lái)源細(xì)胞,CCC-HPE-2細(xì)胞 CM-M064小鼠上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL乙二醇雙(4-羧苯基)(>95.0%(T))Ethylene Glycol Bis(4-carboxyphenyl) Ether質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

大鼠癌細(xì)胞;MADB1069,9-雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]芴(>98.0%(GC))9,9-Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl]fluorene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

IL1RAP Others Human 人 IL1R3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) pre-ELM-11(>98.0%(T))pre-ELM-11質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)添加物PAGS苯均四酸(>98.0%(T))Pyromellitic Acid質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)