人細胞說明書冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人細胞說明書
種屬:NCI-H929

類型:懸浮生長

形態(tài):CM2-1培養(yǎng)液中，懸浮，淋巴母細胞樣，圓形，大多數(shù)聚團生長

分離基物:；女性

提供形式:復蘇形式：15ml離心管1支；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費另計。

安全等級:1

模式菌株:未知

應用領(lǐng)域:NCI-H929細胞是一株人細胞，主要研究等。

培養(yǎng)方法

傳代方法:將培養(yǎng)好的懸浮細胞輕輕吹打均勻，分配至3~6個新鮮培養(yǎng)液皿中，輕輕搖勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM2-1培養(yǎng)液。CM2-1培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培養(yǎng)液，含谷氨酰胺。

存儲條件:將懸浮細胞轉(zhuǎn)移至離心管中，(110g，3min)離心，離心完成后用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細胞，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人細胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 草酸依地普侖/草酸艾司西酞普蘭（標準品）Escitalopram Oxalate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

大鼠嗜堿性粒細胞性細胞;RBL-1消旋卡多曲Racecadotril質(zhì)量規(guī)格：>99.5%，EP6.2

BEL-7402細胞，細胞 人口腔表皮樣癌細胞,KB細胞 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2消旋卡多曲（標準品）Racecadotril質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

C57BL/6小鼠T細胞瘤細胞;RMA乙酰螺旋霉素Acetylspiramycin質(zhì)量規(guī)格：>1200u/mg,CP2005

CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 尼羅替尼Nilotinib質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR
小鼠神經(jīng)干細胞柴胡皂苷B2（標準品）Saikosaponin B2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人胚胎，皮膚，肌肉;M-22 人食管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL柴胡皂苷C（標準品）Saikosaponin C質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人間充質(zhì)干細胞(脂肪)cDNAHMSC-ad cDNA柴胡皂苷D(標準品)Saikosaponian D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細胞裂解液 (陽性對照) 常春藤皂苷元(標準品)Hederagenin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

大鼠肝細胞;BRL 3A常春藤皂苷元Hederagenin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,BR
成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)熒光素酶(細菌)，英文名或英文縮寫：Luciferase from Bacteria，級別：精制級，40u/mg，規(guī)格：5克

T/G細胞，人平滑肌細胞 KM小鼠網(wǎng)織細胞瘤株,LⅡ細胞 人真皮成纖維細胞-胎兒裂解物HDF-f L三鈉鹽三(3-磺酰苯... TPPTS,≥95.0% 63995-70-0 250MG 通用試劑

NEC(人細胞) 5×106cells/瓶×2拂橡膠 III Fluoro gum III

Caki-1(人腎透明細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0046C4-2(人細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠單核巨噬細胞;J774A.1ALKPHOS2COMPONENTSYSTEMS堿性嶙酸酶(含酶及稀釋液)生物技術(shù)級1000 UnitsCOLD

綿羊皮膚細胞;OAR-S1硅烷偶聯(lián)劑SILANE COUPLING AGENT
人細胞說明書RTN4R Others Human 人 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酰輔酶A三鋰鹽Acetyl coenzyme A trilithium salt質(zhì)量規(guī)格：95%,美國進口原裝

人*上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL尿素酶,脲酶(巨豆)Urease質(zhì)量規(guī)格：>45 U/mg,進分

HT1080細胞，人成纖維細胞 熱帶念珠菌 tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-1A3蛋白酶VIIIProtease type VIII質(zhì)量規(guī)格：美國原裝進口7-15 units/mg,來源于地衣芽孢桿菌

CCL3 Protein Rat 重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白曲安奈德Triamcinolone Acetonide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

MDBK(牛腎細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphB2 / Hek5 人細胞裂解液 (陽性對照) 曲安奈德(標準品)Triamcinolone Acetonide質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品
收到人細胞說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。