人膠質(zhì)母細胞瘤細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人膠質(zhì)母細胞瘤細胞培養(yǎng)
種屬:A172

類型:腦；膠質(zhì)母細胞瘤

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:含1.5g/L 碳酸氫鈉， 4.5g/L 葡萄糖，4mM L-谷氨酰胺的DMEM，90%；胎牛血清或新生牛血清，10%。

生長特性:貼壁生長
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人膠質(zhì)母細胞瘤細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人關(guān)節(jié)軟骨細胞完全培養(yǎng)基 100mL醋酸氟氫可的(標(biāo)準(zhǔn)品)Fludrocortisone acetate質(zhì)量規(guī)格：含量97%-103%,標(biāo)準(zhǔn)品

Vero細胞，綠猴腎細胞 RSC96(大鼠雪旺細胞) 小鼠瘤株;S180醋酸氟氫可的Fludrocortisone acetate質(zhì)量規(guī)格：>97%

EFNB2 Protein Human 重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白阿折地平Azelnidipine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

U-937(人組織細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠瘤細胞;EL4噻奈普汀酸;噻奈普汀Tianeptine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人平滑肌細胞裂解物HCSMCL噻奈普汀酸;噻奈普汀(標(biāo)準(zhǔn)品)Tianeptine質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
敘利亞倉鼠細胞系;Syrian Hamster AV12鉬粉(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRMolybdenium powder

IFNA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 人細胞裂解液 (陽性對照) 二硫化鉬(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRMolybdenium(IV) sulfide

角膜上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)1-萘乙酸鈉(>98%,植物激素級)質(zhì)量規(guī)格：>98%,植物激素級NAA-Na, 1-naphthaleneacetic acid  salt

BB7.2細胞， 分泌A2抗體B細胞 大鼠細胞,WK256細胞 人臍動脈平滑肌細胞裂解物HUASMCLN-乙酰-DL-纈氨酸(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRN-Acetyl-DL-valine

NCI-H524(人非小細胞細胞) 5×106cells/瓶×2氯舒隆質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRClorsulon
小鼠色素瘤細胞;B16-F1N-Acetyle-D-LeucineN-乙酰-D-白酸1克BR，99%

Hep3B2.1-7細胞，人細胞 人髓母細胞瘤細胞,D341Med細胞 中國倉鼠卵巢細胞;CTLA4 Ig-24Nα-FMOC-Nω-PBF-D... Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH,≥98.0% 187618-60-6 1G 通用試劑

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L](小鼠成纖維 5×106cells/瓶×2啊魏醋;4-羌基3-氧基肉桂醋;咖非醋-3-迷 Fqrulic ccid;3-Mqthoxy-4-xy7noxy cinncMic ccid;Ccffqic ccid 3-Mqthyl qtqr;3-(4-xy7noxy-3-Mqthoxyphqnyl)-2-propqnoic ccid 237-98-4

Promocell C-28014 Mesenchymal Stem CellChondrogenic Diff. Medium w/o, 間充質(zhì)干細胞軟骨分化培養(yǎng)基無誘導(dǎo)劑(即用型) 100ml5-溴-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷，英文名或英文縮寫：Bluo-Gal，級別：BR，98%，規(guī)格：5克

人海馬趾神經(jīng)元RNAHN-h miRNA5 μg82905-08-6姆沙伯　108CHROMOSORB(R) 108
人膠質(zhì)母細胞瘤細胞培養(yǎng)CL-0077Eca-109(人細胞)5×106cells/瓶×2吲哚菁綠Indocyanine Green質(zhì)量規(guī)格：>94%,BS

Wish細胞，人羊膜細胞系 人T細胞瘤,Hat-78細胞 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2靛藍Indigotin質(zhì)量規(guī)格：BS

BGC823(人細胞) 5×106cells/瓶×2甲基藍Methyl blue質(zhì)量規(guī)格：AR

CTSB Others Human 人 Cathepsin-B / CTSB 人細胞裂解液 (陽性對照) 伊文思藍；埃文斯藍Evans Blue質(zhì)量規(guī)格：BS,進分BIOFER,>85%

中國倉鼠卵巢細胞(亞系*);CHO-HCV-p7曲利苯藍Trypan Blue質(zhì)量規(guī)格：BS
收到人膠質(zhì)母細胞瘤細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。