人急性淋巴細(xì)胞 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱(chēng)　人急性淋巴細(xì)胞
種屬:Kasumi-1

類(lèi)型:懸浮生長(zhǎng)

形態(tài):CM2-1培養(yǎng)液中，懸浮，淋巴母細(xì)胞樣，圓形，少數(shù)聚團(tuán)生長(zhǎng)

分離基物:急性髓系；男性

提供形式:凍存管/15ml離心管

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域:Kasumi-1細(xì)胞且有人急性淋巴細(xì)胞的典型特征，是研究人急性淋巴的*材料。

培養(yǎng)方法

傳代方法:將培養(yǎng)好的懸浮細(xì)胞輕輕吹打均勻，分配至3~6個(gè)新鮮培養(yǎng)液皿中，輕輕搖勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件:37℃，5%CO2，CM2-1培養(yǎng)液。CM2-1培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培養(yǎng)液，含谷氨酰胺。

存儲(chǔ)條件:將懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，(110g，3min)離心，離心完成后用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細(xì)胞，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù)，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人急性淋巴細(xì)胞 的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
人胎盤(pán)羊膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL醋酸Hydrocortisone Acetate質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

SAC-II B2細(xì)胞，小鼠腹水瘤細(xì)胞 BRL 3A(大鼠肝細(xì)胞) 人皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-HSF-1醋酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Hydrocortisone Acetate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白 (His 標(biāo)簽)鹽酸伊達(dá)比星IdarubicinHCl質(zhì)量規(guī)格：含量960~1030μg/mg,USP30

RD(人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甲磺酸伊馬替尼Imatinib Mesylate質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人結(jié)膜細(xì)胞裂解物HConFL甲磺酸伊馬替尼（標(biāo)準(zhǔn)品）Imatinib Mesylate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
原代單核細(xì)胞特制基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml去亞甲基小檗堿（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Demethyleneberberine

CREG1 Others Mouse 小鼠 CREG / CREG1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 喹乙醇;喹酰胺醇（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品Olaquindox

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM0501喹乙醇;喹酰胺醇質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BROlaquindox

GP2-293細(xì)胞，人胚腎上皮包裝細(xì)胞 大鼠腎小球系膜細(xì)胞EC(HBZY-1),HBZY-1細(xì)胞 CL-0336FC33(人胚胎腎細(xì)胞(Asp-2基因修飾))5×106cells/瓶×2路路通酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Liquidambaric acid

BC-020(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2女貞苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Ligustroflavone
家貓肺細(xì)胞;FCA-L1Cefazolinwo7iumsalt頭孢拉定V1克USP級(jí)

HCCC-9810細(xì)胞，膽管細(xì)胞型細(xì)胞 人二倍體細(xì)胞系,HL細(xì)胞 小鼠細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]三四胺六乙酸 TTHA,≥98.0% 869-52-3 1G 通用試劑

小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32血紅蛋柏(牛,分末) HqMOGLOBIN 9047-09-0

RTN4R Others Mouse 小鼠 Nogo Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) X-GLUC5-溴-4-錄-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷 (X-Gluc)超級(jí)白色結(jié)晶粉末FROZENsigma

人間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓裂解物HMSC-bm L二本基二錄硅烷;二本基二錄化硅;二錄二本基硅烷Dipxenyldichlorosilane;Dichlorodipxenylsilane
人急性淋巴細(xì)胞 骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)熒光桃紅B,酸性紅92Phloxine B質(zhì)量規(guī)格：AR

U937細(xì)胞，人組織細(xì)胞瘤細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,NS1細(xì)胞 人表皮色素細(xì)胞-淺色素cDNAHEM-l cDNA依萊鉻紅BEriochrome Red B質(zhì)量規(guī)格：AR

NCI-H838(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2固紅RLFast Red RL Salt質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR

CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株) 5×106cells/瓶×2 CL-0150MDA-MB-231(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 Walker氏癌256瘤株;W256固紅紫色LB鹽Fast Red Violet LB Salt質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO莧菜紅Amaranth質(zhì)量規(guī)格：BS
收到人急性淋巴細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。