細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　小鼠微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
種屬:MLMEC

提供形式:P4-5代T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

生長特性:貼壁生長

存儲條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到小鼠微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是小鼠微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人巨細(xì)胞細(xì)胞株;Mo7e膽甲基碳酸酯(>80.0%(GC))Cholesterol Methyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：>80.0%(GC)

TNFRSF1B Others Human 人 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B (aa 1-268, 196 Met/Arg) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 膽乙基碳酸酯(>94.0%(GC))Cholesterol Ethyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：>94.0%(GC)

mCF, 小鼠*成纖維細(xì)胞膽異丙基碳酸酯(>95.0%(GC))Cholesterol Isopropyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

NIH3T3細(xì)胞，NIH SWISS小鼠胚細(xì)胞 人細(xì)胞,ALVA細(xì)胞 人主動脈平滑肌細(xì)胞RNAHASMC miRNA5 μg膽丁基碳酸酯Cholesterol Butyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：

恒河猴腎細(xì)胞;RM-2膽異丁基碳酸酯Cholesterol Isobutyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：
上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)沙蟾毒精(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Arenobufagin

SELL Others Human 人 SELL / CD62L / L-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 坦西莫司,西羅莫司脂化物質(zhì)量規(guī)格：>98%,選擇性的mTOR抑制劑Temsirolimus;CCI-779;NSC 683864

LTK 小鼠結(jié)締組織纖維細(xì)胞富馬酸盧帕他定質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRRupatadine fumarate

CM-H026人內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL富馬酸盧帕他定(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Rupatadine fumarate

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株舒巴坦鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Sulbactam
豚鼠心肌細(xì)胞;GP-H1曲拉通x-1145克2～8℃

3T6-Swiss albino細(xì)胞，胚胎成纖維細(xì)胞 人*癌細(xì)胞,CaPan-Ⅱ/Capan-2細(xì)胞 CM-M040小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL縮水甘油三基錄化銨(+4℃) 2,3-qpoxypropyltrimqthylcmmonium chloridq 3033-77-0

正常大鼠腎細(xì)胞;NRK對本100毫克

CDH6 Others Human 人 CDH6 / KCAD 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三號膽鹽5克RT，避光

人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞cDNAHCPF cDNA2-脫氧胞苷-5-三1酸鈉鹽(+4℃)NA
小鼠微內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)豬內(nèi)皮細(xì)胞;ZYM-SVEC01遠志口山酮；遠志山酮IIIPolygalaxanthone III質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CCDC134 Others Human 人 CCDC134 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 雷公藤定堿Wtlfordine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

透明質(zhì)酸酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL三正丁基十四烷基氯化膦Tributyltetradecylphosphonium chloride質(zhì)量規(guī)格：50%grade

BGC-823人胃腺癌細(xì)胞(低分化) BGC-823 human gasic cancer cells (poorly differeiated) 1640+10% FBS羅漢果皂苷ⅢA1mogroside ⅢA1 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

IL4 Protein Human 重組人 IL4 / Ierleukin-4 蛋白羅漢果皂苷ⅡA2mogroside II A2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品