人骨髓基質(zhì)細(xì)胞說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人骨髓基質(zhì)細(xì)胞說明書
種屬:HS-5

類型:貼壁生長

形態(tài):CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，成纖維細(xì)胞樣，中間凸起，兩端細(xì)長，高密度時(shí)，細(xì)胞連接成網(wǎng)狀

分離基物:骨髓；基質(zhì)細(xì)胞；HPV16轉(zhuǎn)化；男性

提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計(jì)。

安全等級:1

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域:HS-23 and HS-27A 分泌低水平的生長因子，不能用于分離的祖細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系可用于體外脊髓培養(yǎng)或細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)。

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人骨髓基質(zhì)細(xì)胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
CM-H083人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL膽堿非諾貝特Choline Fenofibrate質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

Hepa 1-6, 小鼠細(xì)胞丙磺舒?；?/span>-D-葡萄糖苷酸Probenecid Acyl β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人癌細(xì)胞;MDA-MB-453 人角膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL諾氟沙星-d5Norfloxacin-d5質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人口腔角質(zhì)細(xì)胞cDNAHOK cDNA4-含氧諾氟沙星4-Oxo Norfloxacin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CCL17 Others Mouse 小鼠 CCL17 / TARC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-羥基諾氟沙星N-Hydroxy Norfloxacin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
直腸粘膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)甲氧芐啶（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Trimethoprim

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B 人細(xì)胞，SK-OV-3[SKOV-3]細(xì)胞 BT549(管癌細(xì)胞)西維來司鈉質(zhì)量規(guī)格：含量大于98.5%Sivelestat 

人;Calu-3醋甲唑胺(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99.0%,標(biāo)準(zhǔn)品Methazolamide

IL3RA Others Human 人 IL3RA / CD123 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 齊拉西酮質(zhì)量規(guī)格：含量≥99%Ziprasidone

CM-H029人臍帶單核細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL塞曲司特/西拉達(dá)司/塞拉司特質(zhì)量規(guī)格：含量≥98.0%Seratrodast
RBE, 人肝細(xì)胞6-去氟-6-羥基利培酮質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口6-Desfluoro-6-hydroxy Risperidone

HUVEC, 人臍內(nèi)皮細(xì)胞7-羥基利培酮質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口7-Hydroxy Risperidone

人B母細(xì)胞;HMy2.CIR 人平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL羥基利托那韋質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Hydroxy Ritonavir

人正常肝細(xì)胞;L-02去噻唑基甲氧基碳酰 利托那韋質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Desthiazolylmethyloxycarbonyl Ritonavir

DDR1 Others Mouse 小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 9'-去甲格拉司瓊（格拉司瓊雜質(zhì)C）質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口9'-Desmethyl Granisetron (Granisetron Impurity C)
人骨髓基質(zhì)細(xì)胞說明書NCI-H2452 [H2452]人間皮瘤細(xì)胞 NCI-H2452 [H2452] human skin tumor cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS暈苯(>95.0%(GC))Coronene質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

PGF Protein Mouse 重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)暈苯(升華提)(>98.0%(GC))Coronene (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

馬間葉干細(xì)胞(脂肪)(5×105) Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞 Mouse心環(huán)1(>97.0%(GC))Corannulene質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

豬胚胎傳代細(xì)胞;ST2,5-二苯基-1,3,4-惡二唑(>98.0%(HPLC))2,5-Diphenyl-1,3,4-oxadiazole質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

RAMP3 Others Human 人 RAMP3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2,5-二(1-萘基)-1,3,4-惡二唑(>98.0%(N)(HPLC))2,5-Di(1-naphthyl)-1,3,4-oxadiazole質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)(HPLC)
收到人骨髓基質(zhì)細(xì)胞說明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。