細胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細胞之方法：
小鼠骨髓來源樹突狀細胞說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　小鼠骨髓來源樹突狀細胞說明書
種屬:DC2.4

類型:貼壁生長

形態(tài):CM2-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮樣細胞，長梭形

分離基物:LⅡ瘤株在615小鼠皮下移植后，取*原代培養(yǎng)，傳20代后鑒定：細胞呈多角形、梭形及不規(guī)則形，胞突呈分枝狀，常有大小粗細不等的胞突；經鑒定證明是小鼠樹突狀細胞；

提供形式:復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費另計。

安全等級:1

模式菌株:未知

應用領域:615小鼠皮下移植100%成瘤

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約1.5min取出。傳代用12mL CM2-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM2-1培養(yǎng)液。CM2-1培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培養(yǎng)液，含谷氨酰胺。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉移至液氮中保存。

細胞分類：
第一種：
是凍存產品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到小鼠骨髓來源樹突狀細胞說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
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CLU Others Human 人 CLU / Clusterin 人細胞裂解液 (陽性對照) 氘代鹽酸(50g)Deuterium Chloride質量規(guī)格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O

人成纖維細胞RNAHLF miRNA5 μg1酸-d3(100g )Phosphoric Acid-D3 (D, 99%)質量規(guī)格：D,99%

F13B Others Human 人 F13B / Coagulation factor XIII B chain 人細胞裂解液 (陽性對照) 氘代苯-D6(0.6ml x 10 )Benzene-D6質量規(guī)格：D,99.5%+0.05%TMS

U251 人神經細胞氘代苯-D6(0.5ml x 10 )Benzene-D6質量規(guī)格：D,99.5%

CL-0426RKO-E6(人轉基因細胞)5×106cells/瓶×2氘代苯-D6(0.55ml x 10)Benzene-D6質量規(guī)格：D,99.5%+0.03%TMS
中國倉鼠卵巢細胞(亞系*);CHO-HCV-C三(1,3-二苯基-1,3-丙二酮基)(1,10-鄰二氮雜菲)銪(Ⅲ)(>95.0%(T))質量規(guī)格：>95.0%(T)Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)eur(III)

IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-(2-苯并噻唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(HPLC)(T))質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin

虹膜色素上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml) 3-(2-苯并咪唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(T))質量規(guī)格：>98.0%(T)3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin

Coc2細胞，細胞 人細胞,OVAC細胞 人少突膠質前體細胞(懸浮生長)cDNAHOPC-os cDNA4,4'-雙(5-甲基-2-苯并惡唑基)芪(升華提)(>96.0%(HPLC))質量規(guī)格：>96.0%(HPLC)4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)

非洲綠猴腎細胞;CV-1酞菁(以升華法化)質量規(guī)格：>98.0%(N)Phthalocyanine (purified by sublimation)
大鼠肝細胞瘤;H-4-II-EN-乙酰-D-色酸100克

SFPAC-1細胞，人*癌細胞 人舌癌細胞系,Tca8113-P60細胞 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2α-溴代-γ-丁內酯 2-Bromo-4-butcnolidq 2061-1-

J82(人細胞) 5×106cells/瓶×2乙酰輔酶A25克

Promocell C-21070 Small Airway Epithelial CellGrowth Medium, 小上皮細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml鹽酸奈乙二安5克

人腦膜細胞裂解物HMCL108-48-52.6-二甲基2,6-Lutidine
小鼠骨髓來源樹突狀細胞說明書IL12B Others Human 人 IL12B / P40 人細胞裂解液 (陽性對照) 正十五烷（標準品）N-PENTADECANE質量規(guī)格：內標

豬細胞;ST咖啡酸乙酯（標準品）ETHYL CAFFEATE質量規(guī)格：含量測定

VEGFC Others Rat 大鼠 VEGFC / VEGF-C (aa 108-223) 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬酸無水Citric acid質量規(guī)格：>99%,AR

人氣管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL檸檬酸無水（標準品）Citric acid質量規(guī)格：含量測定

OCM-1A細胞，人低侵襲性脈絡膜色素素瘤細胞 綠色木霉 小鼠樹突狀細胞細胞;DCS硫酸鉀（標準品）Potassium sulfate 質量規(guī)格：含量測定