細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠細(xì)胞形態(tài)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　小鼠細(xì)胞形態(tài)
種屬:LLC

類型:貼壁生長

形態(tài):CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，梭形、圓形

分離基物:肺,；C57BL/6

提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計。

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到小鼠細(xì)胞形態(tài)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。
以下是小鼠細(xì)胞形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
AZU1 Others Human 人 AZU1 / Azurocidin 1 / HBP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 地達(dá)諾辛；去羥肌苷Dideoxyinosine;Didanosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人內(nèi)皮細(xì)胞RNAHLEC miRNA5 μg羊藿苷IIcariin I;  Icariside I質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠垂體細(xì)胞(MPC)(5×105)寶藿苷II；大花羊藿苷A；意卡瑞苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)Baohuoside II質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品

山羊皮膚成纖維樣細(xì)胞;DG-S1槐屬苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Sophoricoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠色素瘤瘤株;B16 小鼠皮膚肥大細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL槐屬苷Sophoricoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,BR
中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系*);CHO-K1R-(+)-托特羅定質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口R-(+)-Tolterodine

NRP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (R)-5-羥甲基托特羅定質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口(R)-5-Hydroxymethyl Tolterodine

卵巢顆粒細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)托吡酯-d12質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Topiramate-d12

SRA01/04細(xì)胞，人晶體上皮細(xì)胞系 人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞,HO-8910PM細(xì)胞 人晶狀體上皮細(xì)胞裂解物HLEpiCL2,3-去亞異丙基托吡酯質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口2,3-Desisopropylidene Topiramate

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7外消旋5-羥甲基去異丙基托特羅定-d6質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口rac 5-Hydroxymethyl Desisopropyl Tolterodine-d6
人神經(jīng)元細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLD-GalactosamineHC1D-半乳糖胺鹽酸鹽5KU高，98%

NRK-49F細(xì)胞，大鼠腎成纖微細(xì)胞 RT4(細(xì)胞) 豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL3甜菜減;甘安醋三安內(nèi)鹽;三銨內(nèi)鹽 Bqtcinq;Lycinq;Glycocoll bqtcinq;Glycinq bqtcinq;TriMqthyl glycocoll cnhydridq;Oxynqurinq;DiMqthyl scrcosinq;(CcrboxyMqthyl)triMqthyl cMMoniuM xy7nochloridq innqr sclt;1-Ccrboxy-N,N,N-triMqthylMqthcncMiniuM innqr sclt;Bqtcinq cnxy7nous 107-43-7

EFNA3 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His 標(biāo)簽)噻唑藍(lán) (培養(yǎng)級) Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (ce... 298-93-1 100MG 染色劑

C918(人眼脈絡(luò)色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1mlChromiumpicolinate羧酸100微升AR，98%

人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞HBdSF(脂多糖、內(nèi))
小鼠細(xì)胞形態(tài)IL1R1 Others Human 人 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 制霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Nystatin質(zhì)量規(guī)格：效價測定

主動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)磺芐西林（標(biāo)準(zhǔn)品）SULBENICILLIN質(zhì)量規(guī)格：效價測定

MST1R Others Human 人 MST1R / CD136 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乙酰螺旋霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Acetylspiramycin質(zhì)量規(guī)格：效價測定

L-O2 人正常胎肝細(xì)胞三氯氨鉑酸鉀Potassium trichloroammineplatinate(II)質(zhì)量規(guī)格：>95%

CM-H019人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL西索米星（標(biāo)準(zhǔn)品）Sisomicin質(zhì)量規(guī)格：效價測定