冷凍保存細(xì)胞之方法？
大鼠內(nèi)皮細(xì)胞 RatCoronary：NormalCoronaryArteryEndothelialCells冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
本公司提供的細(xì)胞都是現(xiàn)貨供應(yīng)，詳細(xì)大鼠內(nèi)皮細(xì)胞 RatCoronary：NormalCoronaryArteryEndothelialCells說(shuō)明書！

大鼠內(nèi)皮細(xì)胞 RatCoronary：NormalCoronaryArteryEndothelialCells

     產(chǎn)品描述：大鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離自正常大鼠內(nèi)皮細(xì)胞，呈單層扁平分布。內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成的內(nèi)壁，是管腔內(nèi)血液及其他壁（單層）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由直至最少的微。公司提供的大鼠內(nèi)皮細(xì)胞，采用膠原酶消化制備而來(lái)。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品大鼠內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(RatcoronaryPrimaCell:NormalcoronaryarteryendothelialcellsCatNo.3-7204)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，大鼠內(nèi)皮細(xì)胞傳3-5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和。
      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度?？萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng)；3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于。

【培養(yǎng)指南】
大鼠內(nèi)皮細(xì)胞 RatCoronary：NormalCoronaryArteryEndothelialCells對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
【細(xì)胞凍存】
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行產(chǎn)品名稱凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

CD59 Others Human 人 CD59 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸氟桂利嗪Flunarizine Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

MouseS 小鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞鹽酸非索非那定（標(biāo)準(zhǔn)品）Fexofenadine Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

獼猴肺細(xì)胞;MML2鹽酸非索非那定Fexofenadine Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

WM451, 人細(xì)胞尼扎替?。?biāo)準(zhǔn)品）Nizatidine質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定

人慢性髓系細(xì)胞;K562 大鼠肺大平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL醋谷胺/乙酰谷酰胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Aceglutamide質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

Hep 3B(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27，人，小鼠，綿羊，豬，大鼠PACAP-27 (human, mouse,ovine, porcine, rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

AGRP Others Human 人 AgRP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27（6-27），人，雞，小鼠，豬，大鼠PACAP-27 (6-27) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人角膜上皮細(xì)胞HCEpiC垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38（16-38），人，雞，小鼠，綿羊，豬，大鼠PACAP-38 (16-38) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

SECTM1 Others Human 人 SECTM1 / K12 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽相關(guān)肽（1-29），大鼠PACAP-Related Peptide (1-29)(rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

HMy2.CIR 人 B 淋巴母細(xì)胞胰多肽，人Pancreatic Polypeptide,human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

P3X63Ag8.653小鼠細(xì)胞 Mouse myeloma cell line P3X63Ag8.653 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS多奈哌齊質(zhì)量規(guī)格：>98%Donepezil

IL12A & IL12B Protein Human 重組人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白多尼培南(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品,一水合物Doripenem

USMC(大鼠平滑肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 HAVSMC, 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞米爾貝肟質(zhì)量規(guī)格：A3+A4>97%Milbemycin oxime

CM-R089大鼠皮膚肥大細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL伐地考昔質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRValdecoxib

CD14 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD14 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 胃膜素,胃粘蛋白,人胃泌素質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRGastrin I,human

大鼠內(nèi)皮細(xì)胞 RatCoronary：NormalCoronaryArteryEndothelialCellsPTPRA Others Human 人 PTPRA / PTPalpha (aa 174-793) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 利巴韋林5'-單磷酸二鋰鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Ribavirin 5'-Monophosphate, Dilithium Salt

瘤牛皮膚細(xì)胞;BIN-S11-β-D-呋核亞硝尿-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口1-β-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxylic Acid Methyl Ester

COLO-320細(xì)胞，腺癌細(xì)胞 直腸腺癌,HR-8348細(xì)胞 人巨細(xì)胞細(xì)胞株;Mo7e3-羧氨基利巴韋林鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Viramidine Hydrochloride

T739小鼠肺腺株;LA79525-O-去乙?；２纪≠|(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口25-O-Deacetyl Rifabutin

HAVCR1 Others Human 人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) HDAC靶點(diǎn)抑制劑質(zhì)量規(guī)格：>98%CUDC-101

【復(fù)蘇的原則】
快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫(kù)全國(guó)各地均可發(fā)貨，全國(guó)統(tǒng)一價(jià)格，本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。