冷凍保存細(xì)胞之方法？
小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞 MouseBrain:NormalCerebralVenousVascularEndothelialCells冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
本公司提供的細(xì)胞都是現(xiàn)貨供應(yīng)，詳細(xì)小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞 MouseBrain:NormalCerebralVenousVascularEndothelialCells說(shuō)明書！

小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞 MouseBrain:NormalCerebralVenousVascularEndothelialCells

     產(chǎn)品描述：小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞的主要功能是維持內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡，合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)參與免疫反應(yīng)，維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡。公司提供的小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞，采用采用膠原酶消化制備而來(lái)。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseBrainPrimaCell：NormalCerebralVenousVascularEndothelialCellsCatNo.3-4491)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞傳5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和。
      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度?？萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng)；3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于。

【培養(yǎng)指南】
小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞 MouseBrain:NormalCerebralVenousVascularEndothelialCells對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
【細(xì)胞凍存】
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行產(chǎn)品名稱凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶 Human鹽酸文拉法辛（標(biāo)準(zhǔn)品）Venlafaxine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

TPST1 Others Human 人 TPST1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸文拉法辛Venlafaxine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3原卟啉IXProtoporphyrin IX質(zhì)量規(guī)格：>95%

BST2 Others Human 人 TETHERIN / BST2 / CD317 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甲磺酸羅哌卡因（標(biāo)準(zhǔn)品）Ropivacaine mesylate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

原代上皮細(xì)胞特制無(wú)血清添加劑Many types of cells包裝：1ml甲磺酸羅哌卡因Ropivacaine mesylate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

SELE Others Rat 大鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 蛋白酶K(進(jìn)分)Proteinase K質(zhì)量規(guī)格：≥30units/mg protein,sigma分裝

CM-H025人*上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL蛋白酶K(Sigma)Proteinase K質(zhì)量規(guī)格：≥30units/mg protein,sigma原裝

HuTu-80細(xì)胞，人十二指腸腺癌細(xì)胞 人細(xì)胞,HME2細(xì)胞 人肝永生化細(xì)胞;THLE-3胰凝乳蛋白酶抑制劑Chymostatin質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分

H9c2(2-1) (大鼠心肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2亮抑蛋白酶肽(進(jìn)口)Leupeptin 質(zhì)量規(guī)格：≥95%,進(jìn)口半硫酸鹽

CD80 Others Human 人 B7-1 / CD80 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑Pepstatin A microbial質(zhì)量規(guī)格：≥90%,進(jìn)分

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9803氫氧化鋁(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAluminum hydroxide

CD59 Others Rat 大鼠 CD59 / CD59A / MAC / IP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 磷酸銨三水(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAmmonium phosphate, tribasic , trihydrate

人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL雷帕霉素/西羅莫司（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Rapamycin(Sirolimus)

FO細(xì)胞，小鼠細(xì)胞 3T6-Swiss albino(胚胎成纖維細(xì)胞) 人臍內(nèi)皮細(xì)胞(人細(xì)胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]甲磺酸雷沙吉蘭質(zhì)量規(guī)格：>98.5%Rasagiline Mesylate

CXCL9 Protein Mouse 重組小鼠 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白白藜蘆醇質(zhì)量規(guī)格：>97.0%,BRResveratrol

小鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞 MouseBrain:NormalCerebralVenousVascularEndothelialCellsNRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽)Bz-rA亞磷酰胺單體質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRBz-rA Phosphoramidite

MA-891(小鼠癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腦成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)i-bu-rG亞磷酰胺單體質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRi-bu-rG Phosphoramidite

神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)PF299804（EGFR抑制劑）質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Dacomitinib

ANGPTL4 Others Human 人 ANGPTL4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Ac-rC亞磷酰胺單體質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAc-rC Phosphoramidite

大鼠腎足突細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLRp-腺苷 3′,5′-環(huán)單硫代磷酸酯鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Rp-Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, Sodium Salt

【復(fù)蘇的原則】
快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫(kù)全國(guó)各地均可發(fā)貨，全國(guó)統(tǒng)一價(jià)格，本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。