試劑準(zhǔn)備：
1. 大鼠核轉(zhuǎn)錄因子κB （NFκB）elisa檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

大鼠核轉(zhuǎn)錄因子κB （NFκB）elisa檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)  Rat nuclear transcription factor-κB /NFκB ELISA Kit
【實(shí)驗(yàn)用途】核轉(zhuǎn)錄因子κB (nuclear transcription factor-κB，NF-κB)，NF-kB，是一種蛋白質(zhì)分子，其結(jié)構(gòu)為一種體內(nèi)的生物誘導(dǎo)分子(biological trigger)，是在體內(nèi)許多疾病的生理作用上扮演了重要的角色，從到，再到，皆與之脫離不了關(guān)系，NF-kB發(fā)現(xiàn)與哺乳動(dòng)物的細(xì)胞，平時(shí)結(jié)合與另一分子--IkB，IkB使得NF-kB分子失去生物活性，當(dāng)一組啟動(dòng)信號(hào)啟動(dòng)NF-kB后，IkB脫離NF-kB，NF-kB恢復(fù)活性，進(jìn)入細(xì)胞核。NF-kB位于TLR下游信號(hào)通路的樞紐位置，當(dāng)細(xì)胞受到生物應(yīng)激刺激后激活NF-kB，活化的NF-kB進(jìn)入細(xì)胞核調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，啟動(dòng)針對(duì)病原微生物的固有免疫和獲得性免疫。所提供的elisa檢測(cè)試劑盒是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定elisa檢測(cè)試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過(guò)PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。

試劑配制：
1、大鼠核轉(zhuǎn)錄因子κB （NFκB）elisa檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事項(xiàng)：
1. 大鼠核轉(zhuǎn)錄因子κB （NFκB）elisa檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)試劑盒使用前請(qǐng)保存在2-8℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品若未用完，請(qǐng)廢棄。
2. 微量試劑運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置，會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請(qǐng)1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?，F(xiàn)象，微加熱至40℃使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。
（加熱溫度不要超過(guò)50℃）使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫。
4. 不同批號(hào)的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。
5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，zui好使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無(wú)微量振蕩器，可在反應(yīng)孵育前手工輕輕混勻。
6. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作雙孔檢測(cè)。
7. 試驗(yàn)中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗(yàn)結(jié)果。
8. 試驗(yàn)中請(qǐng)穿著試驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測(cè)血液或者其他體液標(biāo)本時(shí)，請(qǐng)按國(guó)家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條列執(zhí)行。
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