人臍動(dòng)脈組織提取物培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
Aconitase 1 鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體
ATAD3A 三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體
APOJ 載脂蛋白J抗體
APOH 載脂蛋白H抗體
ART4 二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶4抗體
AKIRIN2 AKIRIN2蛋白抗體
ARL8B ADP核糖基化樣因子8B抗體
ATAD2 三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體
AKIRIN1 AKIRIN1蛋白抗體
ASZ1 錨定蛋白樣蛋白1抗體
Adenylate kinase 2 腺苷酸激酶2抗體
Acrosin 精子頂體前體蛋白抗體
AIM1L 黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體
AER61 未知糖基化轉(zhuǎn)移酶AER61抗體
FE65 鐵蛋白Fe65抗體
ARHI 抑癌基因ras同源家族1抗體
AP2 alpha 轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體
ANP 心鈉素抗體
AARS2 丙氨酰tRNA合成酶2抗體
AKAP12 絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體
Alpha-Synuclein 核突觸蛋白α抗體
APG4B 自噬相關(guān)蛋白4B抗體
ADAMTS12 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體
alpha Actinin 4-Loading Control α-輔肌動(dòng)蛋白4(內(nèi)參)抗體
Alkaline Phosphatase 堿性磷酸酶抗體
AU1 tag AU1 tag標(biāo)簽抗體
